Изучение мутагенности вспомогательных лекарственных форм в тест- системе Drosophila melanogaster

Среди комплекса проблем, связанных с загрязнением окружающей среды, одной из актуальных и вместе с тем наименее разработанной является проблема оценки потенциальной генетической опасности химических соединений, в том числе фармакологических препаратов.
Развитие цивилизации превратило лекарственные средства в существенный компонент среды обитания человека. Отечественными и зарубежными исследованиями установлено наличие мутагенной активности у части широко распространенных лекарств - психотропных, антибактериальных и др. Конкретные последствия применения генетически активных средств в настоящее время непредсказуемы. Очевидно, что использование таких препаратов может привести к увеличению мутационного груза в человеческой популяции, к увеличению наследуемых генетических патологий и лежать в основе злокачественных новообразований [1].
В результате возникло новое направление в генетике - генетическая токсикология, основной задачей которой является создание методологии для классификации химических соединений по степени их потенциальной генетической опасности для человека, с целью осуществления различных регулирующих действий, направленных на предотвращение или уменьшение возможных генетических последствий воздействия химических соединений.
Вторая проблема генетической токсикологии связана с необходимостью постоянного тестирования большого числа химических соединений. Невозможность экспериментального исследования генетической активности химических соединений у человека обусловила создание и использование для этих целей различных тест систем, среди которых широко используется тест-система Drosophila melanogaster.
В связи с этим целью настоящей работы стало изучение мутагенности и канцерогенности фармакологического средства в тест-системе Drosophila melanogaster.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
- освоить тест-систему сцепленных Х-хромосом дрозофилы для учета рецессивных летальных мутаций, сцепленных с полом;
- определить уровень...

2.2.1 Метод Меллер-5

Схема опыта и используемая в нем линия мух носят название метода Меллер– 5, разработанного Г. Меллером метод выявления и учета рецессивных, сцепленных с полом летальных мутаций у Drosophila melanogaster. Фенотипическими маркерами служат мутации Bar (B) доминантный ген полосковидных глаз и рецессивный ген абрикосовых глаз (wa). Преимущество такой линии-анализатора заключается в том, что обе Х-хромосомы самки содержат две инверсии – sc⁸ и δ 49. Инверсия sc⁸ захватывает большую часть Х – хромосомы. Поскольку в длинных инверсиях перекрест все же изредка происходит, в инверсию sc⁸ введена другая, более короткая инверсия, δ 49, которая подавляет перекрест в средней области Х – хромосомы. Порядок генов в хромосоме sc⁸ δ 49 нарушен дважды, и поэтому перекрест в ней полностью исключен. В итоге обе инверсии не связаны с рецессивным летальным действием, и гомозиготные по хромосоме Меллер–5 самки и такие же гемизиготные самцы жизнеспособны [62].

Фармация регулярно создает новые лекарственные препараты, ставшие существенным компонентом нашей среды обитания. Среди вновь созданных фармацевтических средств, также как и среди некоторых широко распространённых лекарственных препаратов, обнаружено наличие мутагенных или канцерогенных свойств. Очевидно, что использование таких препаратов представляет реальную генетическую опасность для человека. Поэтому необходимо создание достаточно оперативной и экономичной системы тестирования этих соединений в отношении их потенциальной генетической опасности для человека.
Невозможность экспериментального исследования генетической активности химических соединений на человеке обусловила создание и использование для этих целей различных тест - систем, таких как анализ хромосомных аберраций в костном мозге у млекопитающих или учет хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови человека. Однако проведение таких исследований для каждого вещества является дорогостоящим и продолжительным по времени, поэтому проводится просеивающая проверка химических веществ с использованием краткосрочных тестов для учета генных мутаций, таких как тест Эймса на микроорганизмах Salmonella или тест РЛСПМ на Drosophila melanogaster. Преимуществом дрозофилы является наличие у нее микросомальной фракции схожей с таковой в пищеварительной системе человека.
Мы изучали средство гроссгемин разработанного ТОО Медицинского Института г. Караганды. Изучение мутагенных и канцерогенных свойств фармакологического средства проводились в тест-системе Drosophila melanogaster методами Меллер-5 и сцепленных Х-хромосом на основании учета рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций. Для анализа мутагенности была использована 5% раствор средства, соответствующего рекомендованной концентрации для лечения человека. Для выявления канцерогенности гроссгемина использовался 0.5% раствор средства.
Учет летальных мутаций проводился с помощь статистического метода хи-квадрат. Обработка данных эксперимента на...