Теоретическое и экспериментальное обоснование состава конъюгата коллоидного золота с антителами для разработки иммунохроматографической Тест-системы

Введение……………………………………………………………………….…10
1 Обзор и анализ научно-технической и патентной информации…………12
1.1 Диагностика хеликобактериоза – состояние проблемы……………....12
1.1.1 Положительные и отрицательные стороны методов, применяемых для диагностики хеликобактериоза…………….12
1.1.2 Актуальность применения экспресс-методов иммуноанализа для диагностики возбудителей инфекционных заболеваний…17
1.1.3 Актуальность разработки иммунохроматографических тест-систем для диагностики Helicobacter pylori………………….…19
1.2 Основные компоненты и принцип работы иммунохроматографических тест-систем…………………………………………………….…………22
1.3 Влияние состава конъюгата нанодисперсных частиц с антителами на эффективность иммунохроматографической тест-системы………….25
1.3.1 Сравнительная оценка маркеров, используемых для получения конъюгата их с антителами при разработке иммунохроматографических тест-систем……………………....25
1.3.2 Методы получения и критерии оценки препаратов коллоидного золота, определяющие преимущество их использования для разработки ИХ тест-систем………………………………….…..30
1.3.3 Обоснование выбора антител для включения их в конъюгат с наночастицами золота………………………………………..…..43
1.4 Выводы по разделу…………………………………………………..….49
2 Техническое обоснование темы. Задачи дипломной работы……………………………………………………………………....…50
3 Раздел теоретических и экспериментальных исследований………….…...51
3.1 Материал, реактивы, оборудование и методы……………………..….51
3.1.1 Материал………………………………………………………….51
3.1.2 Реактивы…………………………………………………………..51
3.1.3 Оборудование…………………………………………………….51
3.1.4 Методы……………………………………………………………53
3.2 Экспериментальные исследования…………………………………….53
3.2.1 Получение коллоидного золота с заданным размером по методу Френса…………………………………………………………….53
3.2.2 Постановка реакции для определения «золотого числа»….…..66
3.2.3 Результаты экспериментального обоснования состава конъюгата коллоидного золота с антителами для разработки иммунохроматографической тест-системы, предназначенной...

Иммунохроматографический анализ с успехом используется для диагностики возбудителей инфекционных заболеваний благодаря своей высокой специфичности, чувствительности и простоте манипуляций при проведении анализа. В частности, при диагностике хеликобактериоза он актуален как для первичной диагностики, так и для контроля эффективности лечения. Перспективна разработка иммунохроматографической тест-системы для диагностики хеликобактериоза, направленная на обеспечение быстрого, нетрудоемкого анализа, с возможностью количественного определения антигена Helicobacter pylori в различном биологическом материале.
Иммунохроматографическая тест-полоска, предназначенная для анализа, представляет собой мультимембранный композит, на определенные участки которого предварительно нанесены все необходимые для анализа иммунокомпоненты. Контакт с жидкой пробой инициирует движение ее компонентов вдоль мембран тест-полоски под действием капиллярных сил. Результатом анализа является формирование в определенных участках тест-полоски иммунных комплексов, содержащих маркер. Исходя из наличия или отсутствия этого связывания, делается вывод о присутствии в пробе аналита.
Одним из основных компонентов ИХ тест-систем является конъюгат различных наночастиц с моноклональными антителами. Уже более 40 лет благодаря доступности, простоте получения и детектирования в мембранных системах иммуноанализа в качестве маркера используются наночастицы коллоидного золота.
Препараты коллоидного золота, предназначенные для разработки ИХ тест-систем, получают различными методами, которые условно делятся на две группы: дисперсионные (диспергирование металлов) и конденсационные (восстановление соответствующих солей металлов). Конденсационные методы более распространены, чем дисперсионные. Наиболее часто КЗ получают восстановлением галогенидов золота (например, HAuCl4) с использованием химических восстановителей (цитрат натрия, аскорбиновая кислота, боргидрид натрия и др.).
Контроль качества полученных...